Анализ пцр, подскажите лечение — советы врачей на каждый день

Коронавирусная инфекция COVID-19 – это вирусное, стремительно распространяющееся заболевание, которое впервые было зафиксировано в декабре 2019 года в китайском городе Ухань.

В течение всего нескольких месяцев инфекционная патология стремительно распространилась по всему миру, заставив правительства разных стран ввести жесткие карантинные меры.

Чисто инфицированных во всем мире ежедневно увеличивается, и чтобы контролировать ситуацию, а также сдерживать распространение болезни, врачами были разработаны специфические методы тестирования, которые помогут обнаружить инфекцию в организме и назначить адекватное лечение.

Что делать если тест на коронавирус положительный? В первую очередь больной должен соблюдать самоизоляцию, всегда быть на связи с лечащим врачом, а при присоединении патологической симптоматики, указывающей на развитие осложнений, вызывать скорую помощь.

Что делать, если пришел положительный результат анализа COVID-19

Положительный тест на коронавирус говорит о том, что пациент болен, является носителем SARS-CoV2 или его иммунитет сумел побороть опасную инфекцию.

Результаты зависят от того, какой метод лабораторной диагностики был использован для проведения тестирования – ИФА или ПЦР Важно помнить, что достоверность полученных данных варьируется в диапазоне 75 – 80%, поэтому если по результатам тест положительный, не стоит впадать в панику. Врачи советуют сдать повторный анализ, результаты которого помогут подтвердить либо опровергнуть диагноз.

О результатах лабораторного исследования пациента уведомит администрация лаборатории, прислав электронное письмо, СМС-сообщение или позвонив по указанному номеру. Порядок дальнейших действий определяют такие основные факторы:

• общее самочувствие больного;
• методика, примененная для идентификации возбудителя COVID-19.

Если диагностика проводилась методом полимеразной цепной реакции (ПЦР), которая на сегодняшний день является золотым стандартом диагностирования коронавирусной инфекции, положительный результат говорит о том, что на теперешний момент пациент болен или является бессимптомным носителем патологии. Последний вариант развития событий несет угрозу окружающим, особенно тем, кто наиболее уязвим перед инфекцией:

• пожилые люди;
• дети;
• мужчины и женщины с тяжелыми хроническими патологиями;
• онкобольные.

Серологическое исследование (ИФА) назначается при отрицательной ПЦР. До 93% IgM обнаруживается у ПЦР-негативных больных. Наличие в крови иммуноглобулинов класса М свидетельствует об острой стадии инфекции.

Что делать, если первичный тест на коронавирус положительный? Порядок дальнейших действий будут зависеть от общего состояния больного.

Если положительный результат сочетается с ярковыраженными симптомами заболевания, такими как высокая температура, одышка, сухой кашель, больной подлежит немедленной госпитализации в отделение инфекционной терапии.

Уже на месте будет проведено повторное тестирование и назначена комплексная терапия, соответствующее протоколам ВОЗ.

Положительный результат без наличия симптомов

Что делать, если тест на коронавирусо положительный, но болезнь протекает без симптомов? В таких ситуациях больной должен придерживаться следующих врачебных рекомендаций:

• Позвонить участковому терапевту и сообщить о том, что результат теста на COVID-19 положительный. Врач детально объяснит, что делать дальше, какие меры предпринять, чтобы предотвратить распространение инфекции на окружающих.
• Самоизолироваться на 14 дней. Если общее самочувствие в норме и пациент не нуждается в госпитализации, он должен самоизолироваться на  две недели – период, когда инфекция является наиболее заразной и стремительно распространяется от носителя на окружающих. Все это время необходимо поддерживать связь с лечащим врачом, не менее 2 раз в день измерять температуру тела, обеспечить обильное питье, влажную уборку и проветривание помещения.
• Не контактировать с окружающими. Если больной проживает с членами семьи, то при контакте дома использовать медицинскую маску. Все рабочие и организационные вопросы решать исключительно по телефону. При возможности отказаться от использования вентиляторов, кондиционеров и пр.
• Тщательно контролировать самочувствие. Находясь дома, больной должен тщательно контролировать свое самочувствие, принимать назначенные врачом препараты, соблюдать щадящую диету, придерживаться правил личной гигиены. При ухудшении состояния и проявлении симптомов необходимо связаться с участковым терапевтом или вызвать скорую помощь.
• Первичный положительный тест даже при бессимптомном течении – причина для немедленного обследования всех членов семьи, проживающих на одной территории с заболевшим. Им в обязанность не сменяется соблюдение правил изоляции, однако при любом, даже при незначительном ухудшении состояния необходимо сообщить участковому терапевту, который определит дальнейший порядок действий.

Положительный повторный тест на коронавирус

За весь период пандемии в России были зафиксированы единичные случаи повторного заражения коронавирусной инфекцией. Такие результаты были у людей с тяжелыми хроническими патологиями и ослабленным иммунитетом. Положительные повторные тесты на коронавирус при диагностике методом ПЦР зачастую являются ложными.

В таких ситуациях рекомендуется сдать анализ на специфические антитела.

Если на момент забора образцов организм победил вирус, в крови будут обнаружены иммуноглобулины класса G, вырабатываемые защитной системой уже после болезни, при этом уровень антител IgM, вырабатываемые непосредственно в острой фазе, будет находиться в пределах референсных значений.

Что делать работодателю

Что делать работодателю, если его сотрудник получил повторный положительный тест на коронавирус? Врачи, занимающиеся изучением коронавирусной инфекции, утверждают, что тест на COVID-19 может оставаться положительным в течение месяца после выздоровления.

Связано это с тем, что в организме в этот период есть еще остатки вируса, однако уже переболевший человек не является заразным и не разносит инфекцию. В таком случае пациент считается выздоровевшим, его больничный закрывается, и человек может полноценно возвращаться к своим должностным обязанностям. 

Наименование услуги Цена(руб.)
Скидка

(1 к.д.) КОРОНАВИРУС COVID-19 (SARS-Cov-2), определение РНК (кач.) с забором биоматериала	2000
(CITO 12 часов) НОВЫЙ КОРОНАВИРУС COVID-19 (SARS-Cov-2), определение РНК (кач.) с забором биоматериала	3500
КОРОНАВИРУС COVID-19, ПЦР, на английском языке с забором биоматериала	2250
(1 к.д.) Антитела класса IgA к коронавирусу COVID-19 (Анти-SARS-CoV-2 IgA), полуколичественное определение, метод иммуноферментного анализа с забором биоматериала	1150
(1 к.д.) Антитела класса IgM к коронавирусу COVID-19 (Анти-SARS-CoV-2 IgM), полуколичественное определение с забором биоматериала	1100
(1 к.д.) Антитела класса IgG к коронавирусу COVID-19 (Анти-SARS-CoV-2 IgG), полуколичественное определение с забором биоматериала	1100
(1 к.д.) Антитела класса IgM/IgG к коронавирусу COVID-19 (Anti-SARS-CoV-2 IgM/IgG), полуколичественное комплексное определение, метод иммуноферментного анализа с забором биоматериала	2000
(2 к.д.) Антитела класса IgA/IgG к коронавирусу COVID-19 (Anti-SARS-CoV-2 IgA/IgG), полуколичественное комплексное определение, метод иммуноферментного анализа с забором биоматериала	2200
(2 к.д.) Комплексный иммунитет — определение Антител класса IgG к полноразмерному S белку и к нуклеопротеиду N к коронавирусу COVID-19 , полуколичественное определение с забором биоматериала	2500
Комплексный иммунитет — определение Антител класса IgG к полноразмерному S белку и к нуклеопротеиду N к коронавирусу COVID-19, пол/к с забором биоматериала	2200
Диффиринциальная диагностика ОРВИ, Грипп А и В, коронавируса COVID-2019(Sars-Cov-2) с забором биоматериала	2950

30.09.2019 Отзыв

Когда надо сдавать ПЦР-анализ, а когда – тест на антитела к COVID-19, чтобы получить максимально точный результат

В чем разница между ПЦР-тестом и тестом на антитела к COVID-19 (экспресс-тестом)

Во время ПЦР-теста делают мазок из носа или зева пациента. Из образца слюны или мокроты врачи берут клетку, из которой вычленяют РНК вируса. Метод полимеразной цепной реакции, или ПЦР, выявляет даже небольшое количество генетического материала коронавируса, пишет citydog.by.

Однако высокие концентрации вируса содержатся в выделениях из носоглотки только на ранних стадиях инфекции. Экспресс-тесты же показывают, был ли человек инфицирован COVID-19, даже после того как болезнь отступила.

Все потому, что тесты на антитела к COVID-19 ищут не сам вирус, а следы иммунного ответа на него. Так, на сайте лаборатории «Синэво» поясняют, что тест на антитела к COVID-19 определяет наличие антител класса M и G в крови.

Главврач детской инфекционки: «В этом году мы имеем снижение вирусных инфекций. Может, COVID-19 их вытеснил»

После анализа на антитела возможны три результата, которые обычно интерпретируют так

• Положительный результат на иммуноглобулины М (IgM): вы болеете COVID-19 прямо сейчас;
• Положительный результат на иммуноглобулины G (IgG): вы уже перенесли коронавирусную инфекцию;
• Отрицательные результаты на IgM и IgG: коронавирусной инфекции в организме нет.

ВАЖНО. На сайте «Синэво» уточняют: отсутствие антител M и G в крови может быть и в том случае, если исследование провели слишком рано. Поскольку анализ делает выводы на основе антител, он лучше выявляет ослабевающую или уже побежденную организмом вирусную инфекцию.

 Минздрав прокомментировал смерть 13-летнего подростка из Минска после COVID-19

Кстати, про тесты на антитела: чем конкретно отличаются антитела класса М (IgM) и G (IgG)? И когда они проявляются?

Иммуноглобулины класса M (IgM) – это ранние антитела, объясняют на сайте лаборатории «Инвитро». Обычно их можно обнаружить в крови не раньше 1–2 недель от момента контакта с возбудителем и не ранее 5 дней от появления симптомов.

Выявить антитела класса M можно в течение только 2-3 месяцев: после этого времени IgM-антитела полностью сменяются на IgG. Именно поэтому обнаружение антител класса М говорит о недавнем инфицировании SARS-CoV-2.

Иммуноглобулины класса G (IgG) начинают определяться в крови примерно через 3–4 недели после контакта с вирусом. Чтобы анализ их обнаружил, с момента появления симптомов СOVID-19 у пациента должно пройти не меньше 2–3 недель.

Медики уточняют, что иногда IgG появляются практически одновременно с IgM, но остаются в крови 10 недель и дольше. По наличию и уровню IgG-антител врачи говорят о факте инфицирования в прошлом и, возможно, о выработке специфического иммунного ответа – способности организма распознать вирус при повторной встрече с ним.

• Если результат анализа на антитела неясен, медлаборатория предлагает пересдать тест с интервалом в 7–10 дней, чтобы посмотреть на уровень антител классов М и G в динамике.
•  Инфицированные коронавирусом дети могут дольше взрослых быть разносчиками COVID-19
• Когда надо делать тест на антитела, а когда – ПЦР-тест?

Лаборатория «Синэво» напоминает, что антитела (даже те, которые указывают на активную фазу заболевания) появляются не сразу, а после развития COVID-19. При этом ПЦР-тест показывает заболевание даже в инкубационном периоде.

Поэтому в лаборатории предлагают такую схему для своевременного тестирования.

На сайте invitro.by также пишут, что у инфицированных пациентов во время инкубационного периода и на ранних стадиях инфекции возможен отрицательный результат теста на антитела.

1. А вот интересная информация от производителя тестов на антитела класса G: на сроке более 14 дней от появления симптомов процент выявления антител IgG – 96,8%, на сроке 8–13 дней – 86,4%, 3–7 дней – 26%, до 3 дней – 0%.
2. Умерла главный врач Брестской детской городской поликлиники №1 Татьяна Авдейчук. Ей было 59 лет
3. Что будет, если сдать тест на антитела раньше времени?

По словам главного внештатного инфекциониста комитета по здравоохранению Мингорисполкома по инфекционным и паразитарным заболеваниям Никиты Соловья, все методы диагностики должны применяться на конкретной стадии инфекции, пишет kp.by.

• Если сделать тест на антитела заранее, можно получить ложноотрицательный результат.
• – Так, для выработки антител коронавирусу необходимо время, поэтому тесты на определение антител могут быть ложноотрицательными в первые дни коронавирусной инфекции и показывать результат лишь после 7–10-го (у некоторых пациентов – 14-го) дня заболевания, когда иммунная система наработает антитела в достаточном количестве, чтобы выявить их системой, – объяснил Никита Соловей.
• В случае с ПЦР все наоборот: чтобы получить более точный результат, его рекомендуют делать в первые дни после появления симптомов коронавируса.
• – Тест ПЦР (полимеразная цепная реакция), наоборот, показан в первые дни заболевания, поскольку по мере дальнейшего течения инфекции чувствительность этого метода снижается – вирус уже перестает выделяться из верхних отделов дыхательных путей, и мы не можем его поймать, используя этот метод.

На этой схеме от «Синэво» видно, в какой период времени существует максимальная вероятность получить положительный результат анализа на коронавирус разными методами. Обратите внимание: хотя иммуноглобулины класса M могут появляться и на 7-й день с момента проявления симптомов, их концентрация в крови увеличивается только после 14-го дня.

1. Как долго в крови переболевшего сохраняются антитела?
2. Несмотря на то что коронавирус с нами почти год, однозначного ответа на этот вопрос пока нет.
3. Летом ученые из Медицинского университета Чуцина опубликовали в журнале Nature Medicine исследование, где получалось, что антитела к коронавирусу сохраняются только два или три месяца после заражения СOVID-19, писали CNBC.
4. В более позднем исследовании врачей из медицинского центра Маунт Синай (США), опубликованном в журнале Science, результаты получились оптимистичнее.

Медики изучили данные 30 082 человек, прошедших скрининг в Маунт Синай, с легкой и умеренной формой коронавируса. Почти у всех испытуемых обнаружили устойчивые иммуноглобулины G, которые оставались стабильны в течение как минимум 5 месяцев.

Эти данные подтверждает исследование медиков в Иокогаме, о котором рассказал японский телеканал NHK. Они утверждают, что антитела у людей, переболевших СOVID-19, сохраняются как минимум на полгода и уменьшают риск заболеть повторно. Еще через полгода медики планируют проверить участников исследования заново, чтобы узнать, сохранятся ли антитела в течение года.

ВАЖНО: даже в случае положительного результата на IgG обязательно соблюдение мер социального дистанцирования и использование средств индивидуальной защиты.

Насколько точны тесты на коронавирус? Вот мнение доктора Комаровского

Доктор Евгений Комаровский считает, что и ПЦР-тесты, и тесты на антитела нельзя рассматривать как догму. Известный украинский педиатр пишет, что наличие или отсутствие антител еще ни о чем не говорит: можно переболеть коронавирусом и получить отрицательные анализы.

«У меня в окружении есть люди, которые по симптоматике явно перенесли коронавирусную инфекцию, но в одной лаборатории антитела у них обнаруживают, а в другой в тот же день – нет», – пишет Евгений Комаровский.

Он говорит, что лечение должно в первую очередь зависеть от симптомов, а не от результатов теста.

Многие медицинские лаборатории уточняют, что тест для определения антител классов М и G – это вспомогательный метод диагностики COVID-19. Его результат должен интерпретировать врач.

Доктор Комаровский обращает внимание на то, что в США регулярно публикуют данные об ошибочных результатах тестов.

«Почему мы с вами не имеем регулярных отчетов о том, где и какой процент результатов ошибочный? Почему не выявляют такие лаборатории и не обнародуют данные?» – задается вопросом Комаровский.

Если результат не всегда верный, зачем вообще сдавать тест на антитела?

На сайте invitro.by пишут, что тестирование на антитела рекомендуется:

1. Как дополнительный метод диагностики.
2. При невозможности исследования мазков методом амплификации нуклеиновых кислот (ПЦР-анализ. – Ред.).
3. Для выявления людей с бессимптомной формой инфекции.
4. Для установления факта перенесенной ранее инфекции.
5. Для отбора потенциальных доноров иммунокомпетентной плазмы.

Кроме того, лаборатория напоминает, что массовое тестирование на антитела помогает понять масштабы пандемии и проследить формирование коллективного иммунитета к COVID-19 (коллективный иммунитет образуется, когда доля людей с иммунитетом к заболеванию достаточно велика, чтобы помешать передаче вируса в обществе – прим. ред.).

Недавно медицинская компания «Инвитро» подвела итоги трех месяцев тестирования белорусов на антитела к коронавирусу. За это время тесты на определение антител класса G к COVID-19 прошло более 11 000 человек по всей стране.

По результатам исследования, антитела класса G к коронавирусной инфекции выявлены у 24% пациентов, обратившихся в «Инвитро». В компании говорят, что данные по регионам распределились практически одинаково: антитела класса G в каждой из областей обнаружены у от 22% до 26% пациентов.

Анализ ПЦР — самая точная диагностика на инфекции

Полимеразная цепная реакция (ПЦР) – это современный инструмент диагностики разнообразных инфекций, отличающийся высокой точностью. Анализ ПЦР позволяет определять возбудителей инфекционных заболеваний, опираясь на их генетический материал (РНК или ДНК). Биологическим материалом для исследования может служить кровь, мазок из половых органов, слюна и прочее.

НАЖМИТЕ, ЧТОБЫ ЗАПИСАТЬСЯ

Метод ПЦР  был открыт в 1983. Его создатель Кэри Мюллис (США), за это открытие получил Нобелевскую премию в области химии. Уже за первые десять лет методика стала обязательным лабораторным исследованием во всем мире, получив признание ученых и врачей.

Медицинский центр Диана предлагает провести исследование по методике полимеразной цепной реакции в кратчайшие сроки и с высочайшим уровнем точности. Наша диагностическая база соответствует всем международным стандартам и требованиям.

Какие инфекции можно диагностировать методом ПЦР

На диагностику отправляют гинеколог, уролог или дерматолог. Анализ ПЦР дает возможность диагностировать большое число разнообразных инфекций. В эту группу попадают и скрытые, бессимптомные заболевания, находящиеся в инкубационном периоде:

С помощью метода ПЦР можно обнаружить:

• гепатит C, B;
• уреаплазмоз половых органов;
• ИППП – уреаплазмоз, трихомониаз, гарднереллез,;
• хламидиоз половых органов и дыхательных путей;
• микоплазмоз половых органов и дыхательных путей;
• бактериальный вагиноз;
• кандидоз половых органов;
• инфекционный мононуклеоз;
• туберкулез;
• сальмонеллез;
• туберкулез (легочные и внелегочные формы);
• листериоз, клещевые энцефалиты, болезнь Лайма;
• цитомегаловирусную, папилломавирусную, герпесную  инфекцию;
• детские заразные болезни, выявляемые при беременности и до зачатия – краснуху, паротит, дифтерию, корь;
• ВИЧ.

При каждом из вышеперечисленных заболеваний, обнаруженным другим методом, желательно делать и ПЦР – исследование. Возбудители многих инфекций имеют несколько типов (штаммов), а более точная диагностика делает лечение эффективнее.

Поскольку разные типы возбудителей обладают своими способами передачи инфекции, точное определение возбудителя помогает уберечь от заражения окружающих.

Например, гепатитом А можно заразиться через общие предметы и посуду (болезнь грязных рук), а гепатитом С – только через кровь, медицинские инструменты и половые контакты. Это важно для тех, кто находится рядом с больным.

Суть метода полимеразной цепной реакции

Метод основан на выявлении возбудителя по участкам ДНК или РНК. ПЦР напоминает криминалистику, когда преступника находят по частичкам кожи или волосам, оставленным на месте преступления. Поскольку каждый живой организм имеет уникальную структуру ДНК или РНК.

Метод позволяет безошибочно идентифицировать микроорганизм, даже если он присутствует в исследуемом материале в минимальных количествах. ПРЦ подходит для выявления скрытого носительства, нетипичных, стертых и прочих форм заразных заболеваний. Диагностика отличается высокой точностью, поэтому практически не дает ошибок и ложных результатов.

Анализ часто назначается, как дополнительное обследование, чтобы выявить конкретный тип вируса или микроба.

Достоинства и недостатки метода ПЦР

Анализ ПЦР – результативный диагностический инструмент, позволяющий врачу не только правильно определить тип инфекционного возбудителя в организме больного, но также и количество микробов. Эта особенность позволяет методу ПЦР эффективно обнаруживать и хронические инфекции, к примеру, вирусный гепатит.

Преимущества методики заключаются в следующих особенностях:

• Универсальность. Метод дает возможность определить все известные на сегодняшний день микроорганизмы, вне зависимости от вида исследуемого материала.
• Специфичность. ПЦР позволяет определить ДНК вируса или бактерии со 100% точностью, что не дает ни один другой способ диагностики.
• Чувствительность – даже один мельчайший «обломок» ДНК или РНК может быть обнаружен и идентифицирован, благодаря быстрой реакции образования копий.
• Оперативность – поставить диагноз на основании полимеразной цепной реакции можно уже через несколько часов после забора биологического материала, что дает возможность своевременно приступить к лечению заболевания.
• Возможность проведения количественного анализа. Эта особенность важна при выявлении болезней, вызванных условно-патогенной флорой (например, молочницы). Повышенное содержание грибков кандида  в организме вызывает заболевание, а нормальное количество до 10 3 – 104 КОЕ/тамп. – нет.

Недостатки ПЦР-диагностики – это необходимость в высокотехнологичном оборудовании и высококвалифицированных специалистах. Для анализа нужен специальный бокс-ламинар, где поддерживается необходимая температура и обеспечивается чистота эксперимента.

Как сдать анализ ПЦР правильно: подготовка 

Чтобы понять, как именно следует подготовиться к предстоящему анализу ПЦР, пациент должен обязательно уточнить у своего врача, какой именно биологический материал планируется взять. От этого непосредственно зависит подготовка.

• Выделения из половых органов, мазок из шейки матки или мочеиспускательного канала, моча – посредством исследования данных вариантов материала методом ПЦР эффективно диагностируются инфекции половых органов.
• Вирусный гепатит C, ВИЧ инфекция требуют взятие крови на анализ ПЦР.
• С помощью мазка из зева можно подтвердить или опровергнуть факт наличия инфекционного мононуклеоза.

Мазок у женщин

Для диагностики половых инфекций методом ПЦР у женщин, как правило, берут . При беременности действуют стандартные правила подготовки к анализу ПЦР.

• За пару дней до проведения ПЦР нужно отказаться от спринцеваний, средств интимной гигиены.
• За неделю до анализа на инфекции стоит перестать применять любые виды лекарственных препаратов, разумеется, если они не входят в программу подготовки к анализу ПЦР, прописанную врачом.
• За пару дней до обследования нужно начать воздерживаться от полового акта.
• Подмывание в день анализа ПЦР не нужно, гигиена половых органов проводится накануне вечером, используется только теплая вода.
• За пару часов до сдачи анализа мочиться нельзя.

Мазок у мужчин

Подготовиться к забору мазка из мочеиспускательного канала для проведения ПЦР несложно. Достаточно соблюдать изложенные ниже правила.

• За 2 суток до ПЦР обследования нужно начать воздерживаться от сексуальных отношений.
• Прием лекарств прекращается приблизительно за 7 дней до проведения анализа, если, конечно же, они не были специально назначены врачом.
• Гигиена половых органов должна проводиться накануне вечером, в день анализа ПЦР это делать не стоит.
• Рекомендуется не мочиться примерно 2-3 часа перед сдачей анализа.

Анализ крови

Если в процессе ПЦР анализа объектом изучения станет кровь пациента, правила подготовки к нему следующие.

• Оптимальное время для сдачи крови – утро, анализ нужно обязательно сдавать натощак (минимум 8 часов отсутствия пищи). Воду можно пить свободно.
• Отказ от алкоголя за сутки до ПЦР анализа, отказ от курения за час до него.
• Если здоровье допускает такой вариант, от приема лекарственных средств рекомендуется на время отказаться.
• Перед сдачей проб крови в обязательном порядке следует отдохнуть около 20 минут.
• Накануне ПЦР исследования совершенно исключены эмоциональные и физические перегрузки, они могут сказаться на результатах анализа.

Как проводится тест ПЦР?

Для исследования берется любая среда, в которой может находиться возбудитель, но чаще всего используются:

• Кровь сыворотка или плазма – для выявления множества возбудителей – вирусов гепатита B, C, D, G, герпеса, ВИЧ, цитомегаловируса;
• Моча и сок простаты – при диагностике ЗППП;
• Мокрота, плевральная жидкость, бронхоальвеолярный лаваж – для диагностики легочных и внелёгочных форм туберкулеза;
• Спинномозговая жидкость – для диагностики инфекций нервной системы;
• Околоплодная жидкость – для определения внутриутробных заражений;
• Мазок из зева – для выявления возбудителей инфекционного мононуклеоза и дифтерии; соскобы и мазки со слизистых  для диагностики ЗППП; клетки слизистой желудка и желудочный сок – для выявления бактерии хеликобактер, вызывающей гастрит и язву.

При одном взятии материала можно обнаружить сразу нескольких возбудителей, попавших в организм. Такая универсальность избавляет пациента от дополнительных обследований и лишних трат.

Обнаружить и идентифицировать участки генетической информации удается при помощи специальных эталонных маркеров ДНК (праймеров) созданных для каждого известного возбудителя. Эталон позволяет найти «свой» фрагмент среди миллионов других.

Если это происходит, запускается реакция полимеразной цепи.

ПЦР—реакция делает огромное число копий выявленного участка генной информации (репликацию). Важно, что реплицируются только участки ДНК и РНК, необходимые для проведения анализа. Поэтому так важны чистота эксперимента и умение персонала обращаться с аппаратурой и образцами. Цепная реакция протекает очень быстро, уже через два часа участок ДНК увеличивается в миллионы раз, что позволяет обнаружить и точно идентифицировать инфекцию. Для работы с эталонами пробирки помещают в специальный прибор. При помощи программы задается алгоритм, несколько раз меняющий температуру среды и влияющий на протекание реакции. Результат ПЦР виден сразу после окончания исследования.

Как расшифровать ПЦР анализ

Проведение ПЦР исследования позволяет не просто установить тип инфекции, присутствующий в организме больного, но и оценить его с количественной точки зрения (количество микробов). Расшифровка результатов количественного анализа ПЦР играет важную роль в обнаружении и проверке эффективности лечения большого числа хронических заболеваний, скажем гепатита C.

Результатом анализа ПЦР могут стать положительный и отрицательный ответы.

• Отрицательный результат. Следы инфекции не были выявлены в биологическом материале, который являлся объектом исследования в процессе анализа ПЦР. Как правило, на основании отрицательного результата можно полагать, что в организме действительно отсутствует инфекция.
• Положительный результат. Такой результат анализа ПЦР свидетельствует о том, что следы инфекционного заболевания присутствуют в биологическом материале пациента. Положительный результат анализа ПЦР характеризуется большой степенью точности.

Иногда инфицирование выявляется на фоне полного здоровья и отсутствия признаков заболевания. Некоторые больные считают, что анализ сделан неправильно, но реальная ситуация другая. Если ПЦР показала, что возбудитель в организме есть, значит, он там действительно находится.

Просто инфекционные болезни никогда не начинаются сразу после заражения, имея инкубационный период различной продолжительности. Скрытый период может продолжаться очень долго, например, при СПИДе – несколько лет, пока какие-то механизмы не подтолкнут вирусы к размножению. Возбудитель определяется в организме носителей и тех, кто не долечился.

Очень часто переходят в скрытую (латентную) форму различные ЗППП. В этом случае может понадобиться дополнительная лабораторная диагностика.

Точность расшифровки результатов ПЦР анализа

Метод ПЦР, позволяющий выявлять достаточно большое число инфекций, характеризуется повышенной точностью, чувствительностью и специфичностью. Эти характеристики говорят о том, что с помощью исследования ПЦР можно:

• Максимально точно установить отсутствие или присутствие инфекционного возбудителя.
• Максимально точно определить конкретную разновидность инфекционного возбудителя (специфичность).
• Выявить инфекцию даже в том случае, когда она имеет скрытый характер. Речь идет о низком уровне присутствия в подвергаемом исследованию биологическом материале пациента ДНК микробов (чувствительность).

Преимущества метода ПЦР над иммуноферментным анализом и прочими иммунологическими инструментами выявления инфекции заключается в том, что он реже дает ошибочные результаты. То есть расшифровка анализа ПЦР значительно реже показывает отсутствие инфекционных микробов, если они есть в организме больного.

Кроме того, почти не бывает, чтобы расшифровка анализа выявляла наличие в организме несуществующей инфекции, то есть давала ложноположительные результаты.Разумеется, стопроцентно правильными результаты ПЦР назвать все же нельзя, поэтому необходимо обязательно дополнять это исследование другими методиками.

ПЦР-диагностика

Полимеразно-цепная реакция (ПЦР) – это одно из самых ярких достижений в сфере молекулярной биологии. Метод получил широчайшее распространение в разных областях науки.

Благодаря очень высокой специфичности и чувствительности, метод ПЦР применяется в медицине, биологии, ветеринарии, криминалистике, санитарной службе и других отраслях деятельности человека.

Для анализа методом ПЦР можно использовать любые биологические материалы, которые содержат нуклеиновые кислоты (молекулу ДНК или РНК).

Принцип ПЦР- исследования

У каждого живого существа, по крайней мере, на нашей планете, есть уникальный «отпечаток» — ДНК (дезоксирибонуклеиновая кислота), которая отвечает за передачу наследственных факторов от предков к потомкам.

Структурно эта молекула представляет собой две нити из молекул-азотитых оснований, удерживаемые рядом друг с другом химическими связями и скрученные в спираль (считается, что для компактности). Из курса биологии вы можете помнить такие названия, как аденин (А), гуанин (Г), тимидин (Т) и цитозин (ц). Это 4 нуклеотида, которые и создают последовательность ДНК.

Вирусы хранят свою генетическую информацию в другой нуклеиновой кислоте – РНК. Информация об уже изученных ДНК и РНК хранится в научных базах лабораторий.

После того, как был изобретен метод ПЦР, для многих возбудителей различных заболеваний (бактерии, грибки и вирусы) были созданы свои специфические генетические детекторы (праймеры) — уникальные последовательности нуклеотидов, характерных только для конкретного возбудителя.

И если поместить их в пробирку с исследуемым материалом, при наличии в нем ДНК или РНК «живых» возбудителей, праймеры запускают реакцию репликации – создания огромного числа копий, которое можно идентифицировать визуально. Т.е. они начинают копировать свою ДНК/РНК десятки раз. И при подсчете результатов сотрудники лаборатории могут понять, есть ли искомые бактерии и вирусы в исследуемом образце, или нет, именно поэтому результаты ПЦР чаще всего качественные, т.е. «обнаружено» или «не обнаружено».

Кому мы обязаны появлением метода ПЦР?

Со слов американского биохимика Керри Мюллиса (Kary Mullis), идея идентифицировать живые организмы по короткому участку их генетического кода (ДНК) пришла ему в голову в 1983 году, по пути с работы домой. А в основе этой идеи, лежала работа другого американского биохимика, Артура Корнберга (Arthur Kornberg), которая в свое время не нашла отклика у научного сообщества.

Керри допустил возможность того, чтобы взять молекулу ДНК какого-либо организма, с помощью высокой температуры «распустить» ее спираль на две нити, специфическими маркерами-праймеры пометить уникальные для этого микроорганизма участки ДНК и затем, применив фермент ДНК-полимеразу, создать из двух нитей две новые молекулы ДНК. Но уже содержащие в себе меченные праймеры. И потом останется просто искать эти участки в диагностическом материале.

В итоге, корпорация CETUS, в которой работал Мюлис, выделила ему команду ученых. И в 1985 году, в издании Американского общества генетики человека, появилась публикация с теоретическим обоснованием ПЦР, как метода идентификации генетического материала живых организмов.

Как это все происходит в лаборатории

Выделение ДНК

Сначала пробу биологического материала подготавливают: центрифугируют, осаждают и т.д. Затем лаборантам необходимо выделить ДНК из полученного биологического концентрата. Амплификация (увеличение числа копий ДНК) Важнейший этап исследования.

Проводится в термоциклере и именно здесь проходят все процессы, подпадающие под определение полимеразно-цепная реакция: денатурация, отжиг, элонгация. Денатурация Самый первый этап – развернуть (денатурировать) нуклеиновые кислоты, чтоб сделать их доступными для дальнейшей работы.

Осуществляется путем нагрева реакционной смеси до 80-90 °C. Отжиг Денатурированные (распущенные) ДНК/РНК обрабатывают праймерами — изготовленными в лабораторных условиях коротенькими цепочками нуклеиновых кислот.

Благодаря запрограммированному участку, праймеры прикрепляются только к тем нуклеиновым кислотам, для которых были созданы. Например, праймер для вируса простого герпеса 1 типа, никогда не свяжется с ДНК другого вируса, микроорганизма или клетки.

Именно праймеры обусловливают крайне высокую специфичность ПЦР – способность реагировать только на нуклеиновые молекулы конкретных типов, видов классов и даже штаммов микроорганизмов. Или отдельные виды клеток живых организмов.

Элонгация

Или синтез. После завершения процесса отжига, в реакционной смеси создают условия для активности полимеразы. Фермент, ориентируясь на молекулы праймеров (а не исходных нуклеиновых кислот), начинает синтез новых ниток ДНК/РНК. Которые становятся копиями исходных, искомых молекул нуклеиновых кислот. Такой температурный цикл проводится 30 и более раз.

В результате, даже при изначально небольшом количестве искомого генетического материала, в реакционной смеси накапливается значительное число «помеченных» праймерами нуклеиновых кислот (растет экспоненциально, с удвоением при каждом цикле).

Обнаружить большие количества ДНК/РНК намного проще, за счет чего реализуется еще одно преимущество ПЦР – высочайшая чувствительность.

Детекция

Оценка результатов ПЦР проводится несколькими путями:

1. Электрофорез в вязкой среде. Суть в том, что ДНК/РНК заряжены электрически и движутся к одному из электродов. В среду (агар или полиакридный гель) добавляют краситель ДНК (например – бромистый этидий). В процессе сеанса электрофореза, молекулы нуклеиновых кислот движутся и формируют скопления, подкрашенные этидием. Под ультрафиолетом, это выглядит в виде полосок разной толщины и яркости.
2. Метод гибридизации. Используются праймеры, заранее помеченные люминофором (флуорофором). После нужного числа температурных циклов, применяют специальный прибор – детектор флюоресценции. За счет того, что в образец можно добавлять флуорофоры для разных мишеней (они будут и светиться под ультрафиолетом разным цветом), метод гибридизации подходит для диагностики сразу нескольких мишеней в одном образце.
3. ПЦР диагностика в реальном времени (real-time PCR). Отличается тем, что детекция проводится прямо в процессе амплификации. Для этого нужны зонды-люминофоры (из предыдущего пункта) и специальные приборы ДНК-амплификаторы. Эти устройства оценивают нарастание яркости люминофора после каждого температурного цикла и впоследствии, вычисляют исходное число искомых нуклеиновых кислот в образце.

Электрофорез и гибридизация подходят только для качественной оценки, то есть дают ответ на вопрос, есть ли в образце искомый материал. ПЦР в реальном времени – единственный доступный метод количественной оценки. Если мишеней для праймеров в образце не окажется, то температурные циклы пройдут в холостую и при детекции будет получен отрицательный результат.

Преимущества методики ПЦР

Всего разработано более 10 разных методик амплификации, применяемых лабораториями в зависимости от исходных условий и поставленных целей.

Общим для них есть высокая чувствительность (для положительного результата достаточно 40 (!) или менее искомых копий ДНК в 1 мл образца, то есть вероятность ложноотрицательного ответа ничтожно мала. И очень высокая специфичность: вероятность ложноположительного ответа составляет менее 1%.

Но точность результатов сильно зависит от качества сбора диагностического материала, тщательного соблюдения всех технических требований к каждому этапу и качеству оборудования, расходных материалов (буфера, праймеров, раствора для отмывки и т.д.).

Области применения в медицине

В дерматовенерологии ПЦР используют для выявления венерических заболеваний: микоплазменной, хламидийной инфекций, сифилиса, генитального герпеса и др. Инфекционисты активно используют ПЦР для диагностики туберкулеза, ВИЧ, вирусных гепатитов, герпеса, мононуклеоза, вируса Эпштейн-Барр и др.).

А с помощью ПЦР в реальном времени, оценивая вирусную нагрузку, врачи могут составить мнение о динамике заболевания, отклике на лечение, что особенно актуально для пациентов с ВИЧ, принимающих терапию. Также благодаря ПЦР врачи могут в течение нескольких дней с уверенностью идентифицировать коклюш и паракоклюш, выявить возбудителей эпидемии ОРВИ.

Уточняются типы вируса гриппа, циркулирующие на определенной территории, на основании чего появляется возможность разработать эффективную вакцину для каждого сезона гриппа. В течение суток или быстрее можно установить вид возбудителя кишечной инфекции, а значит – назначить адекватное лечение и обнаружить вероятный источник заражения.

Летом, ПЦР актуальна для диагностики заболеваний, передаваемых иксодовыми клещами: боррелиоза (болезни Лайма), клещевых энцефалитов. Метод позволяет работать с любым биологическим материалом. Гемотрансмиссивные инфекции (сифилис, ВИЧ, гепатиты, боррелиоз) исследуются по пробе венозной крови или спинномозговой жидкости. Кожные болезни (герпес, грибки) – по соскобу с пораженного участка.

Венерические и урологические – по образцу мочи, спермы, влагалищного отделяемого. Так что в медицине, ПЦР применяется везде, где нужна высокая точность и быстрота получения результатов.

Лабораторные исследования, выполняющиеся методом ПЦР:

пцр диагностика на Инфекции:

ПЦР на ВИЧ ПЦР на Вирусные гепатиты