Иммуноферментный анализ (ИФА): как проводится анализ? Стоимость. Расшифровка результатов

Современная диагностика не обходится без лабораторных высокочувствительных анализов. Раньше для установления причины заболевания и обнаружения возбудителя инфекции врачи проводили разные микроскопические многоступенчатые исследования.

Сегодня, чтобы опровергнуть или подтвердить первоначальный диагноз, надо сделать единственный тест – иммуноферментный анализ (ИФА).

Данное лабораторное исследование помогает оценить состояние здоровья человека и диагностировать гематологические, онкологические, аутоиммунные, инфекционные патологии.

Что такое иммуноферментный анализ крови

Метод иммуноферментного анализа – это современное лабораторное исследование крови на присутствие в ней антигенов, антител к возбудителям и вирусам болезни.

Метод ИФА помогает врачу выявлять этиологию заболевания, определять ее фазу, давность происхождения, уровень опасности для человека и вносить в лечение необходимые корректировки.

Чаще других при иммуноферментном анализе исследуют наличие антител групп M и G. Что они из себя представляют?

При попадании патогенного микроорганизма в кровоток, иммунная система включает защитную реакцию в виде выделения антител (иммуноглобулинов). Эти вещества связываются с клеткой и выявляют, является ли она частью организма или пришла извне.

Если система установила, что микроорганизм чужеродный, то число антител возрастает с целью борьбы с болезнетворным вирусом. Иммуноглобулины (Ig) бывают нескольких видов: одни появляются в период инфицирования, другие остаются на протяжении всей жизни, вырабатывая стойкий иммунитет.

Антитела в медицине обозначаются: A, D, E, M, G.

Методом ИФА исследуют кровь, хотя существует и другие виды иммуноферментного анализа. Как правило, они различаются типом взятой жидкости, на основании которой далее проводится изучение состава и определение наличия антигенов. При этом для исследования берется как кровь человека, так и другие жидкости:

содержимое стекловидного тела;
слизь из цервикального канала и уретры;
околоплодные воды;
мазки;
спинномозговая жидкость.

Показания к назначению

Иммуноферментное исследование крови помогает выявить онкомаркеры (факторы раково-эмбрионального антигена, некроза опухоли, аденомы простаты и других).

Также анализ определяет недуги щитовидной железы, исследуя гормональные включения в сыворотке крови (пролактина, прогестерона, тиреотропного гормона (ТТГ), тестостерона). ИФА помогает выявить наличие поражения организма кишечными паразитами и гельминтами.

Кроме того, исследование назначают пациентам, у которых необходимо определить наличие следующих заболеваний:

аллергических реакций;
иммунодефицита;
недугов вирусного происхождения (гепатит, герпес, вирус Эпштейна-Барр, цитомегаловирус);
венерических болезней, передающихся половым путем ЗППП (уреаплазма, сифилис, трихомонада, хламидиоз, микоплазма);
болезней печени;
нейросифилиса (инфекционное поражение ЦНС (центральной нервной системы)).

Анализ крови на ИФА часто проводится во время предоперационного комплексного обследования для определения уровня гормонов и оценки качества проводимого лечения.

Высокая точность полученных данных помогает врачу иметь представление о развернутой картине состояния здоровья.

При этом получение результатов происходит за короткий временной промежуток, что позволяет отслеживать динамику развития заболевания.

Преимущества метода

Бесспорными плюсами метода ИФА крови является высокая чувствительность, т.е. возможность определить искомое вещество, даже при малой его концентрации; и специфичность, подразумевающая безошибочность диагностики. Кроме того, исследование сыворотки крови методом ИФА имеет следующие преимущества:

возможность проведения процедуры во время беременности;
расшифровка результатов помогает выявить стадию и развитие заболевания;
точное определение концентрации ТТГ для установления патологии или нормы;
возможность проведения полноценной диагностики на раннем сроке болезни;
раннее обнаружение ЗППП;
проведение ИФА возможно даже при температурных колебаниях окружающей среды;
быстрый срок предоставления результата;
удобство и простота проведения анализа;
высокая чувствительность;
реагенты для проведения исследования могут храниться около года;
возможность проведения массового обследования в очагах инфекции;
раннее выявление паразитов;
отслеживание динамики прогрессирования инфекционного заболевания;
минимальное влияние человеческого фактора;
для анализа нужен небольшой объем биоматериала.

Недостатки

Главным недостатком иммуноферментного анализа крови считается то, что при проведении исследования врач заранее должен иметь предположение о природе болезни.

При диагностике инфекционных заболеваний нельзя случайно найти возбудителя и установить его иммуноферментные свойства.

Тест лишь способен указать на наличие антител в крови пациента, косвенно свидетельствующих о присутствии вредоносного микроорганизма.

Кроме того, при нарушении техники выполнения или неправильной подготовке, анализ может показать ложноположительный или ложноотрицательный результат. Исследование сыворотки крови ИФА – точный, но при этом дорогой метод, поэтому к нему следует обращаться в крайних случаях. Интерпретацию результатов надо доверять лишь квалифицированному специалисту.

Подготовка

Иммуноферментный анализ необходимо проводить, придерживаясь рекомендаций врача, т.к. на результаты исследования часто влияют разные внешние факторы. Основные правила подготовки к ИФА:

венозную кровь надо сдавать строго натощак (в норме, последний прием пищи должен быть за 12 часов до исследования);
необходимо накануне проведения анализа исключить прием любых лекарственных препаратов (если пациент принимает антигистаминные (противоаллергические) средства, следует проконсультироваться с доктором о том, за сколько до начала ИФА надо их отменить);
нельзя перед обследованием курить и пить алкогольные напитки, т.к. это негативно повлияет на результат;
следует обязательно выспаться перед анализом;
надо исключить любые физические нагрузки, стрессовые факторы;
диагностика большинства гормонов женской репродуктивной системы потребует взятия крови в определенные дни менструального цикла.

Как проводится

Для проведения иммуноферментного анализа у пациента берется кровь из локтевой вены строго натощак. Больной заранее должен сообщить врачу о наличии болезней и принимаемых препаратах, чтобы результаты исследования не были искажены. Как правило, все лекарства надо прекратить пить за 16 дней до ИФА. Ощущения при проведении процедуры похожи на взятие крови во время биохимического анализа.

Материал отправляют в лабораторию, где из крови выделяют сыворотку, в которой находятся антитела. Полученный состав помещают в пробирку с антигенами. Это могут быть самые разные аллергены (молоко, шерсть, пыльца, цитрусовые), возбудители вирусных и инфекционных болезней и другие.

После получения реакции все остатки сыворотки сливают. При помощи специальных индикаторов специалисты определяют количество антител. Срок выполнения ИФА зависит от лаборатории. Как правило, результаты исследования могут предоставить в срок от двух дней до недели.

Расшифровка ИФА

Иммуноферментный анализ крови помогает определить наличие в организме антител. Существуют несколько классов иммуноглобулинов:

IgM. Появляются самые первые после заражения. Наличие данных антител указывает на появление болезни в любом случае, т.к. у здорового человека этот класс отсутствует. Как правило, иммуноглобулины IgM присутствуют в крови примерно 6 недель.
IgA. Антитела содержатся в большом количестве в слизистых оболочках, защищая организм от проникновения патогенных микробов. Если у пациента присутствует данный класс, необходимо интенсивнее бороться с болезнью. Ведь иммуноглобулины А возникают лишь при хроническом заболевании. Исчезновение IgA свидетельствует об уничтожении инфекции.
IgG. Иммуноглобулины данного класса свидетельствуют о том, что человек либо является носителем инфекции, либо уже перенес заболевание. Данные антитела вырабатываются после IgM через месяц после заражения. Иммуноглобулины класса G могут присутствовать в организме на протяжении 5-6 лет, защищая его от рецидива заболевания, а при сифилисе такие антитела находятся пожизненно.

Статья в тему: Как лечить протрузию дисков позвоночника поясничного отдела?

При проведении анализа ИФА в детском возрасте (до 1,5 лет) следует учитывать, что кровь ребенка содержит антитела IgG матери к инфекциям. Хотя это не означает, что малыш болен, скорее данный факт – норма.

Наличие класса M свидетельствует о внутриутробной или приобретенной после рождения инфекции, т.к. антитела IgM матери не способны проникать в детский организм через плаценту.

Расшифровка возможных комбинаций наличия или отсутствия антител 3 классов представлена в таблице:

Расшифровка	IgA	IgM	IgG
Отсутствует иммунитет к инфекции	–	–	–
Хроническая инфекция находится в стадии обострения	+	+	+
Присутствует постинфекционный или поствакцинальный иммунитет	–	–	+
Есть хроническая инфекция	+/-	–	+/-
Острая инфекция	-/+	+	-/+

Расшифровку результатов ИФА должен производить квалифицированный врач. Как правило, (+) говорит о положительном исходе анализа, а (-) – об отрицательном.

Результат, который показывает отсутствие или наличие вещества, именуется качественным. Иногда его дополняет количественный, который отображает число различных веществ в организме.

Часто тест-система имеет собственные референтные (соотносимые) значения. Превышение таких показателей означает наличие патологий у пациента.

Противопоказания

Кардинальных противопоказаний для проведения иммуноферментного исследования не выявлено. Иногда при беременности, когда у пациентки наблюдается непрерывное изменение гормонов в крови, может понадобиться неоднократное проведение анализа для более достоверного результата. Диагностический метод не рекомендуется использовать после:

хирургических вмешательств;
гемолиза (разрушения эритроцитов);
переливания крови;
взятия пункции или биопсии биологического материала.

Цена иммуноферментного анализа крови

Стоимость исследования ИФА зависит от политики медицинского учреждения, вида анализа и определяемого антигена, т.к.

исходя из этих факторов, рассчитывается цена реагентных наборов и устанавливается сложность проведения исследования.

Как правило, иммуноферментный анализ крови – это общедоступная процедура, средняя стоимость метода варьируется от 300 до 2000 рублей. Примерные цены на иммуноферментный анализ крови в Москве представлены в таблице:

Определение антител	Стоимость в рублях
Анти-Хламидия IgG	1000-1300
К цитомегаловирусу IgM/IgG	300-700
Антитела класса IgM к Хламидии	600
К кандиде	320-450
Антитела к трихомонаде	200-1500
К микоплазме	340-520
Антитела к хеликобактер	200-2450

Видео

Ифа на коронавирус

Проведение ИФА на наличие коронавируса позволяет с довольно высокой точностью определить, сталкивался ли организм обследуемого с возбудителями COVID-19. Спустя 1-2 дня после сдачи биоматериала устанавливают, болен ли человек или уже выздоровел.

Это биохимическое исследование считается наиболее информативным, так как направлено на выявлении антител. Если они циркулируют в системном кровотоке, то иммунная система сопротивляется коронавирусам.

Или одержала над ними победу, что указывает на приобретение человеком иммунитета минимум на два месяца.

Зачем нужен тест на антитела

Выполнение теста на антитела к коронавирусу необходимо, прежде всего, самому обследуемому. В условиях самоизоляции страдает психологическое состояние. У мнительных, склонных тревожиться даже по пустякам людей, постепенно нарастает беспокойство за свое здоровье.

Они ищут у себя признаки коронавирусной инфекции и часто находят. Так как бесплатное тестирование проводится только при наличии выраженных клинических проявлений (кашель, высокая температура, проблемы с дыханием), то при слабых симптомах или их отсутствии в нем будет отказано.

В этом случае стоит прибегнуть к обследованию методом ИФА — иммуноферментного анализа.

Что покажут результаты анализа:

был ли ранее инфицирован коронавирусом человек;
в какой форме протекало заболевание;
сформировался ли иммунитет и насколько он крепок;
наличие коронавирусов в организме, степень тяжести инфекционной патологии.

Исследование не занимает много времени, но во время эпидемии результатов придется подождать 1-3 дня. В качестве биообразца используется венозная кровь, поэтому за сутки к анализу требуется подготовиться — не принимать алкоголь, отказаться от жирной пищи и некоторых видов лекарств.

Важно: Если по данным ИФА человек тяжело переносит коронавирусную инфекцию, то ему назначают препараты для повышения качества иммунного ответа организма.

Число заразившихся возбудителями коронавирусной инфекции в России приблизилось к 585 тысячам. Ее опасность заключается в быстром внедрении патогенов в легкие. В них с избытком накапливается патологический экссудат, разрушаются поверхностно-активные вещества, выстилающие альвеолы.

Результатом становится ухудшение газообмена, также возникают серьезные проблемы с дыханием. Нередко хорошо чувствующий себя утром человек вечером оказывается под аппаратом ИВЛ.

Поэтому важно выявить коронавирус на начальных этапах внедрения в организм, до возникновения тяжелейших осложнений.

С этим хорошо справляется ИФА, определяющий стадию течения инфекции. Кому стоит пройти тестирование:

сотрудникам магазинов, аптек, транспортных служб, доставки, мест общественного питания;
врачам, среднему и младшему медицинскому персоналу.

Тестирование методом Ифа на коронавирус обязательно следует пройти людям, включенным в группу риска

Человеку без признаков коронавируса, но контактировавшему с инфицированными, целесообразно провериться методом иммуноферментного анализа. Возможно, он бессимптомно перенес инфекцию или она есть в данный момент.

В последнем случае человек является вирусоносителем и способен заразить окружающих, в том числе пожилых родственников. Экспресс-тесты на антитела к коронавирусу работают по принципу глюкометров — для анализа необходима капля крови.

Как правило, такие тесты показывают результат в течение 20-30 минут.

Подготовка к исследованию

Необходимо правильно подготовиться, чтобы получить достоверные результаты после первого тестирования. Что для этого требуется:

Лабораторные исследования на коронавирус

за сутки отказаться кофе, алкогольных напитков, жирных блюд, продуктов, насыщенных солью и пряностями;
избегать в течение дня открытых солнечных лучей;
при возможности не принимать препараты с противомикробным, противовирусным или антибактериальным действием;
отказаться от чрезмерной двигательной активности, тяжелых физических нагрузок в течение суток перед тестированием.

Для ИФА сдают кровь преимущественно из локтевой вены в утреннее время. Если обследуемый человек не должен по медицинским показаниям пропускать очередной прием пищи, то тестирование выполняется спустя 3-5 часов. Сотрудники лабораторий рекомендуют не курить за час до сдачи крови, согласовать медикаментозную терапию хронических заболеваний с лечащим врачом.

Забор крови проводится лаборантом или врачом, который прибыл на дом пациента для обследования или выполнения платного тестирования. Он просит человека согнуть руку в локте, накладывает жгут.

После сжимания и разжимания кулака вена заполняется кровью. Врач обрабатывает место прокола антисептическим раствором, чтобы исключить инфицирование тканей в местах введения иглы.

При заборе биоматериала используется стерильный шприц.

Важно: Для тестирования на коронавирус методом ИФА требуется 10-20 мл крови из локтевой вены.

Бесплатное ИФА-тестирование на наличие коронавирусов делают в государственных медицинских учреждениях и исключительно по направлению врача.

Кровь сдают и в специализированной лаборатории, аккредитованной Роспотребнадзором, оборудованной современной аппаратурой, оснащенной качественными тест-системами.

Цена теста на коронавирус зависит от его вида (качественного или количественного), загруженности клиники, стоимости используемых реактивов. Вызов сотрудников лаборатории на дом обойдется на порядок дороже.

Обследование пациентов на коронавирус методом ИФА проводят в лабораториях, аккредитованных Роспотребнадзором

Сделать тест получится после оформления заявки и оплаты на сайте частной лаборатории. Результаты можно будет узнать спустя несколько дней на сайте, по телефону или по электронной почте. Начиная с последней декады марта текущего года масштабное тестирование проводится в нескольких клиниках. Где сдать кровь для проверки методом иммуноферментного анализа:

«Гемотест»;
«Инвитро»;
«Хеликс».

Этими лабораториями были сданы необходимые документы для получения лицензии на диагностирование коронавирусной инфекции. В частных медцентрах ИФА проводится платно, а направления от врача не требуется. Но провериться получится только при отсутствии симптомов опасной патологии инфекции — высокой температуры, кашля, боли в горле, затрудненного дыхания.

Как выполняется тестирование

Исследование на коронавирус с помощью ИФА обычно проводится непрямым неконкурентным методом. На начальном этапе выполняют сорбция антигенов, которые переносятся в лунки лабораторной посуды.

Затем в них добавляют определенное количество плазмы, в которой содержатся антитела или иммуноглобулины. Эти белки со сложной структурой вырабатываются иммунной системой после внедрения коронавирусов в дыхательные пути.

Они необходимы для обнаружения патогенов и последующего уничтожения.

При контакте антител с антигенами происходит образование высокомолекулярных комплексов, настолько тяжелых, что они оседают на дне лунок. Лаборанты вводят специальные реагенты для окрашивания содержимого в различные цвета.

Биохимическую диагностику коронавируса выполняют и методом прямого конкурентного ИФА, при котором используют иммобилизованные на твердых поверхностях специфические антигены с образованием меченных и немеченных комплексов.

Носитель отмывают, добавляют субстрато-хромогенные реагенты, окрашивающие биообразцы.

Качественное

Этот метод ИФА применяется в экспресс-системах, использование которых позволяет получить данные спустя четверть часа.

Проведение подобного тестирование необходимо для определения циркулирующих в кровеносном русле антител. Результаты бывают только отрицательными, сомнительными и положительными.

Количество иммуноглобулинов, а, следовательно, качество сформировавшегося иммунитета и его приблизительную продолжительность, выявить не удастся.

На заметку: Экспресс-системы на коронавирус сейчас востребованы у сотрудников крупных аэропортов и железнодорожных вокзалов для ускоренной диагностики коронавируса у пассажиров.

Результаты таких исследований выражаются в титрах (1:200, 1:320). Так называется предельное разведение пробы сыворотки или другой биологической жидкости, при котором обнаруживается активность антител с помощью ИФА. С их помощью отслеживают нарастание титров при использовании парных биообразцов с определенным для коронавирусной инфекции временным промежутком.

Значимым для диагностики является изначально высокое значение, или четырехкратное и более увеличение. Результаты количественного исследования указывают всегда в конкретных единицах, например, МЕ/мл. Это необходимо для оценки сформировавшегося у человека иммунитета или степени тяжести инфекционно-воспалительного процесса.

Трактовка полученных данных

Принцип иммуноферментного исследования заключается в проверке плазмы на наличие антител к коронавирусам. Проведение анализа требуется для обнаружения таких разновидностей иммуноглобулинов:

М. Содержание этих антител наиболее высоко в первые дни инфекционного процесса;
G. Они уничтожают антигены, продолжают находиться в организме человека, препятствуют повторному проникновению патогенов;
А. Иммуноглобулины локализуются преимущественно в слизистых дыхательных путей, защищая их внедрения инфекционных агентов в клетки.

Тест методом ИФА для обнаружения антител позволяет оценить состояние иммунитета переболевших коронавирусом

В лабораторных исследованиях биообразцов венозной крови информативны именно эти иммуноглобулины. По их количественному содержанию оценивают, на какой стадии находится коронавирусная инфекция. В этой таблице приведена возможная интерпретация самых распространенных результатов иммуноферментного анализа:

Расшифровка данных ИФА

IgM	IgG	Вероятное состояние обследованного
+	—	Человек является носителем коронавирусов, может стать источником заражения для окружающих, включая коллег и членов семьи
+	+	Человек болен, причем с момента внедрения в дыхательные пути коронавирусов прошло не менее десяти дней
—	+	Человек болен, коронавирусная инфекция протекает достаточно тяжело с выраженной симптоматикой
—	—	Человек здоров, его организм никогда не сталкивался с возбудителями коронавирусной инфекции

Более информативен количественный иммуноферментный анализ. По сравнению с качественным исследованием количество полученных ложноотрицательных и ложноположительных результатов незначительно.

Как расшифровывают данные:

Ig(M)³1, Ig(G) любые параметры — в организме протекает интенсивный инфекционно-воспалительный процесс, что требует использования мощных препаратов для профилактики осложнений, включая атипичную пневмонию;
Ig (M)
Ig (M)

В диагностике методом ИФА требуются определенные навыки оценки. Сотрудники ведущих лабораторий информируют клиентов, что часто одного анализа недостаточно. Специалисты при интерпретации данных ориентируются на клиническую картину, оценивают или динамику титров антител, или замену классов антител.

Советы, как быстро провериться

Совет №1

Исследование на COVID-19 нельзя пройти анонимно. Необходимо иметь при себе документ, подтверждающий личность. А также внесите паспортные данные в графы таблицы при заполнении заявки на сайте медицинского учреждения.

Совет №2

Заявка оформляется только на одного человека. Если ИФА-тестирование желают пройти несколько членов семьи, проживающих по одному адресу, заявку нужно заполнить на каждого из них.

Совет №3

Не стоит тратить деньги на ИФА. Сейчас в Москве тестирование на наличие антител к коронавирусу производят бесплатно во всех государственных учреждениях здравоохранения в рамках массового обследования населения.

Ответы на частые вопросы

Почему государство оплачивает тестирование население на антитела к коронавирусу?

Проведение массового тестирования позволит получить достоверные статистические данные о количестве инфицированных коронавирусом и переболевших людей в разных возрастных и профессиональных группах.

А выполнение количественного ИФА помогает выявить лиц с крепким иммунитетом. В экстренных ситуациях они могут быть донорами плазмы.

Например, при развитии тяжелейшего осложнения коронавируса — тяжелого острого респираторного синдрома, или атипичной пневмонии.

Как долго сохраняется иммунитет у переболевших?

Медики считают, что у человека с повышенным уровнем IgG снижается вероятность повторного заражения коронавирусом. Но пока нет убедительной доказательной базы этого утверждения.

Не систематизирована информация о том, защищают ли антитела от последующего вторжения, и как долго сохраняется подобная защита. Коронавирусы мутируют, а значит, рецидив возможен.

Поэтому пренебрегать мерами предосторожности не стоит.

Иммуноферментный анализ

Иммуноферментный анализ (ИФА) — один из видов иммунохимического анализа. Он основан на высокоспецифической иммунологической реакции антигена (АГ) с соответствующим антителом (АТ) с образованием иммунного комплекса. При этом один из компонентов конъюгирован с ферментом. В результате реакции фермента с хромогенным субстратом образуется окрашенный продукт, количество которого можно определить спектрофотометрически.

Любой вариант ИФА содержит 3 обязательные стадии:

Стадия узнавания исследуемого соединения специфическим антителом;
Стадия формирования связи конъюгата с иммунным комплексом или со свободными местами связывания;
Стадия превращения ферментной метки в регистрируемый сигнал.

В реакции участвуют:

Твердая фаза;
АГ и АТ;
Конъюгат (антиген или антитело, меченые ферментом);
Ферментный маркер;
Субстрат;
Стоп-реагент (чаще всего применяют серную кислоту).

Твердая фаза

В качестве твердой фазы для проведения ИФА можно применять различные материалы: полистирол, поливинилхлорид, полипропилен и другие. Твердой фазой могут служить стенки пробирки, 96-луночные и др. планшеты, шарики, бусины, а также нитроцеллюлозные и другие мембраны, активно сорбирующие белки.

Антигены и антитела

АГ и AT, используемые в ИФА, должны быть высокоочищенными и высокоактивными. АГ должны обладать высокой антигенностью, оптимальной плотностью расположения и количеством антигенных детерминант.

Чувствительность ИФА зависит от концентрации, активности и специфичности используемых антител.

Используемые АТ могут быть поли- или моноклональными, различного класса (IgG или IgM) и подкласса (IgG1, IgG2).

Чувствительность и специфичность метода повышается при использовании моноклональных антител. В этом случае появляется возможность обнаруживать низкие концентрации АГ (AT) в образцах.

Ферментные маркеры: наибольшее применение нашли пероксидаза хрена (ПХ), щелочная фосфатаза (ЩФ) и β-D-галактозидаза.
Субстраты
Выбор субстрата, в первую очередь, определяется используемым в качестве метки ферментом, так как реакция «фермент-субстрат» высокоспецифична.

Для ПХ в качестве субстрата используют 3,3’,5,5’-тетраметилбензидин (ТМБ хромоген). Происходит цветная реакция, интенсивность которой зависит от количества связанного определяемого вещества;
Для ЩФ субстратом является 4-нитрофенилфосфат;
β-D-галактозидаза катализирует гидролиз лактозы с образованием глюкозы и галактозы.

Классификация ИФАВ основу классификации методов ИФА положено несколько подходов:

1 — по типу реагентов, присутствующих на первой стадии ИФА:

В конкурентном ИФА на первой стадии в системе присутствуют одновременно анализируемое соединение и его аналог, меченный ферментом и конкурирующий за центры специфического связывания с ним;
Для неконкурентных методов характерно присутствие на первой стадии только анализируемого соединения и специфичных к нему центров связывания.

2 — по принципу определения исследуемого вещества:

Прямое определение концентрации вещества (АГ или АТ). Используют антитела к исследуемому веществу, соединенные со специфической меткой. В этом случае метка будет находиться в образовавшемся специфическом комплексе АГ-АТ. Концентрация определяемого вещества будет прямо пропорциональна регистрируемому сигналу;

Непрямое определение концентрации вещества – по разности общего числа мест связывания и оставшихся свободными центров связывания. Концентрация определяемого вещества при этом будет возрастать, а регистрируемый сигнал снижаться, следовательно, в данном случае прослеживается обратная зависимость от величины регистрируемого сигнала.

3 — по типу результатов:

Количественный;
Полуколичественный;
Качественный.

Конкурентный ИФА

На твердой фазе иммобилизованы специфические моноклональные антитела;
В лунки панелей вносят в известной концентрации антиген, меченный ферментом, и исследуемый образец. Параллельно в соседних лунках ставят положительный и отрицательный контроли. Для построения калибровки используют стандартный немеченый антиген в различных разведениях. Проводят инкубацию и отмывку;
Добавляют субстрат, инкубируют, останавливают реакцию при развитии оптимального окрашивания в лунках с положительным контролем;
Проводят учет результатов на ИФА-ридере. Концентрация определяемого вещества обратно пропорциональна оптической плотности.

Конкурентный ИФА для определения антител: искомые антитела и меченые ферментом антитела конкурируют друг с другом за антигены, сорбированные на твердой фазе.

Неконкурентный «сэндвич» – вариант ИФАОсновным достоинством метода является высокая чувствительность, превосходящая возможности других схем ИФА.

На твердой фазе иммобилизованы моноклональные антитела или аффинно-очищенные поликлональные антитела;
В лунки панелей вносят исследуемый образец, параллельно ставят положительный контрольный образец и отрицательный контрольный образец в различных разведениях. Инкубируют и отмывают;
В лунки вносят меченные ферментом моноклональные или поликлональные антитела —конъюгат. После инкубации проводят отмывку для удаления несвязавшихся антител;
Вносят субстрат, инкубируют. Реакцию останавливают при достижении оптимального окрашивания в лунках с положительным контролем;
Проводят учет результатов на ИФА-ридере. Концентрация определяемого вещества прямо пропорциональна оптической плотности.

Качественный анализ часто используют при скрининговых исследованиях и диагностике инфекционных заболеваний. Результат исследования определяется при сравнении его оптической плотности с расчетной величиной критической оптической плотности (ОПкрит., «Cut-off»).

Формулу для расчета «Cut-off» указывают в инструкции к тест-системе. В расчете «Cut-off» могут участвовать как усредненные значения оптических плотностей положительных и отрицательных контролей, так и оптическая плотность специального контрольного образца — контроля уровня среза. Если оптическая плотность образца выше, чем Cut-off, образец считается положительным на специфические антитела.

Для полуколичественного варианта проведения методики рассчитывают отношение между средней оптической плотностью образца и оптической плотностью Cut-off.

Образцы рассматриваются как:

положительные, если отношение более 1,1;
сомнительные, если отношение 0,9–1,1;
отрицательные, если отношение менее 0,9.

Сомнительные результаты анализа нельзя однозначно интерпретировать и для уточнения результата необходимо повторить обследование через 1–2 недели.

Методом ИФА определяют:

Гормоны;
Онкомаркеры;
Антитела (IgG, IgM) к возбудителям заболеваний — ToRCH-инфекций, туберкулеза, сифилиса, к вирусу гепатита С (ат ВГС), микоплазме, хламидиям, лямблиям, Helicobacter pylori и др.;
Антигены вирусов —гепатит D, Е, А (ВГD, ВГЕ, ВГА), гепатит С (ВГСсore), гепатит В (НВs, НВе НВсore);
Аутоиммунные заболевания.

Источники:

Анализ ИФА — иммуноферментный анализ | Университетская клиника

С помощью ИФА – иммуноферментного анализа – определяют не только наличие инфекции, но и примерное время заражения, а также обнаруживают обострения хронических инфекционных процессов. Методика позволяет выявить заболевания до возникновения симптомов.

Девушка сдает кровь

Показания к проведению ИФА-анализа

Возможное заражение гепатитами B, C, D (дельта) – пожелтение кожи и склер, потемнение мочи, светлый кал, кожный зуд, боль в правом подреберье.
Подозрение на инфицирование туберкулезом и ВИЧ – кашель, боли в костях, повышение температуры, ухудшение общего состояния, похудение, склонность к инфекциям, увеличение лимфоузлов, нарушение работы кишечника, появление крови в мокроте.
Признаки сифилиса – появление язвы (твердого шанкра) на любой части тела, увеличение лимфоузлов, различные высыпания на коже и слизистой. Исследование позволяет обнаружить не только свежие, но и запущенные случаи болезни.
Подозрение на заражение различными венерическими инфекциями. ИФА-анализ нужно сдать при возникновении боли во время мочеиспускания, выделений из уретры половых путей, различных высыпаний в интимной зоне, неприятного запаха мочи, появлении в урине мути и гноя. Методика выявляет антитела к различным возбудителям половых инфекций – хламидиям, микоплазмам, уреаплазмам.
Подозрение на кандидоз (молочницу), проявляющийся творожистым налетом в интимной зоне, во рту, в паховых складках, области заднего прохода, а также белыми выделениями из половых путей, напоминающими свернувшееся молоко. Иммуноферментный анализ крови позволяет выявить не только наличие возбудителя, но и его концентрацию.
Возможное заражение паразитами, проявляющееся нарушением работы кишечника, тошнотой, рвотой, анемией (малокровием), отеками, болями в мышцах, слабостью, головной болью. Метод выявляет паразитирование простейшими – лямблиями и гельминтами (глистами) – трематодами, трихинеллами, эхинококком. ИФА намного информативнее анализа кала, поскольку выявляет даже возбудителей, находящихся вне кишечника.
Подготовка к беременности. Перед ее планированием нужно обследоваться на TORCH-инфекции (токсоплазмоз, краснуху, цитомегаловирус), приводящие к аномалиям развития плода. Обоим родителям нужно также сдать кровь на гепатит и половые инфекции. Анализы на TORCH-инфекции сдают повторно на 12 неделе беременности.
Планируемое стационарное лечение, подготовка к оперативным вмешательствам, гинекологическим, хирургическим и урологическим процедурам. В этом случае ИФА-анализы сдаются непосредственно перед госпитализацией или операцией, поскольку срок их действия ограничивается одним-двумя месяцами.
Донорство – всех потенциальных доноров крови и её элементов, яйцеклеток, сперматозоидов, костного мозга обязательно обследуют на сифилис, гепатит и ВИЧ.
Прохождение различных медкомиссий, в которые, как правило, входят ИФА-анализы на сифилис, гепатиты, вирусы ВИЧ типа 1 и 2. Многие комиссии также включают исследования крови на туберкулез и ЗППП.

Подготовка к ИФА-анализу

Вечером перед сдачей крови нельзя употреблять жирную и тяжелую пищу, поскольку это может привести к ложноположительным результатам. Можно пить воду и несладкие напитки. Алкоголь запрещен. Кровь берется натощак, в течение получаса перед ее сдачей нельзя курить.

Отказ от курения

Что значит ИФА-анализ и как он проводится

Суть этого исследования – обнаружение в сыворотке крови и измерение концентрации антител (иммуноглобулинов, Ig). Эти соединения выделяются организмом в ответ на попадание антигенов – чужеродных белков, принадлежащих возбудителям инфекции.

При проведении анализа методом ИФА в сыворотку крови добавляют реактивы, содержащие «меченые» антигены. Эти компоненты «ищут» антитела–иммуноглобулины, выработанные организмом в ответ на имеющуюся инфекцию, и соединяются с ними. Такая реакция называется антиген-антитело.

То есть это исследование ищет не самих возбудителей, а вещества, образовавшиеся из-за их вторжения. Поскольку белки антигенов, входящие в состав реактивов, метят определённым образом, их соединения с иммуноглобулинами можно обнаружить лабораторным путем. При выявлении в образце сыворотки крови комплексов антиген-антитело ИФА-анализ считается положительным.

Лабораторные исследования

Применяемые реактивы «настроены» на конкретных возбудителей. Это дает возможность устранить ложноположительные тесты, указывающие на несуществующее заражение.

Исследования дают возможность выявить примерный период заражения, а также определить характер и тяжесть болезни. С помощью этого метода также определяют содержание каждого из иммуноглобулинов или их общую (суммарную) концентрацию, которая меняется в зависимости от периода и тяжести заболевания.

В разные периоды болезни выделяется несколько видов антител (иммуноглобулинов, Ig):

IgM – образуются в острую фазу болезни, т.е. примерно через 2 недели после инфицирования. Затем их уровень постепенно падает.
IgA – появляются в разгар инфекционного процесса. По мере выздоровления их содержание уменьшается. Если уровень IgA в ходе лечения не снижается, велика вероятность, что болезнь перешла в хроническую форму.
IgG – выявляются на этапе выздоровления. Они могут долго обнаруживаться в организме даже после полного излечения. В некоторых случаях такие иммуноглобулины остаются в организме пожизненно. В такой ситуации ИФА крови показывает не имеющуюся, а когда-то перенесенную инфекцию.

Обнаружение IgM и IgG указывает на обострение хронического инфекционного процесса, поэтому считается неблагоприятным признаком.

Преимущества ИФА-анализа

Выявление болезней до возникновения симптомов, а также инфекций, имеющих скрытую вялотекущую и атипичную форму.
Высокая чувствительность, выявляющая концентрацию антител до 0,05 нг/мл. Это позволяет обнаружить возбудителей, находящихся в организме в малых концентрациях.
Простота проведения реакции и её автоматизация, дающие возможность получить результаты в достаточно короткий срок.
С помощью ИФА-диагностики можно не только выявить инфекцию, но и определить примерный срок заражения, а также её тип течения (острая, хроническая).
ИФА-анализ с высокой достоверностью выявляет микроорганизмы, которые не диагностируются при помощи микроскопии, посевов и некоторых других методов.
Возможность проведения количественного анализа, показывающего концентрацию антител. По этому показателю можно судить о степени инфицированности и периоде болезни.

Сочетание двух методов обследований ИФА и ПЦР (обнаружение микроорганизмов по фрагментам их генного материала) дает возможность с практически 100% точностью определить все имеющиеся инфекции.

Такое сочетание позволяет минимально сократить «период окна», во время которого возбудитель уже находится в организме, а ИФА-анализ отрицательный, поскольку еще не успели выработаться антитела.

Анализы на инфекции

ИФА-анализы на различные инфекции можно пройти в «Университетской клинике». Исследования проводятся с применением новых технологий и реактивов, что позволяет добиться их высочайшей точности.

При положительных результатах ИФА нужно обратиться к врачу, который проведет расшифровку анализов и назначит лечение. После окончания терапии нужно обследоваться повторно, чтобы убедиться, что болезнь полностью пролечена.

Доктор Мак